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犬硫酸類肝素elisa試劑盒樣本如何進行處理檢測

瀏覽次數:133發布日期:2021-05-10
   肝素elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被犬硫酸類肝素(HS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的犬硫酸類肝素(HS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
  肝素elisa試劑盒樣本處理及要求:
  1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
  2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2-8C1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
  3.組織勻漿:用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。
  推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。再將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
  4.細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃
  或-80℃保存,但應避免反復凍融。
  注:標本溶血會影響檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
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