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PCR擴增試劑盒實驗時的幾大事項說明

瀏覽次數:134發布日期:2020-10-21
   PCR擴增試劑盒提供DNA擴增所需要的基本試劑。DNA擴增時,用戶需要自行準備模板和擴增所需要的引物。高溫嗜熱Pfu DNA聚合酶主要用于對保真度要求非常高的DNA擴增,這些擴增要求擴增的產物中不能出現突變等錯誤。
  PCR擴增試劑盒實驗事項:
  1.樣本上PCR平臺可做的樣本包括血液,唾液,口腔拭子,在實驗中,對于DNA投入量要求不是很高,根據不同項目需求,DNA投入量的范圍在100pg到100ng之間。
  2.進行PCR反應前,可以將所有gDNA的濃度稀釋到同一濃度,并轉移到PCR8聯管中,一方面是便于排槍操作,另一方面是加入相同起始量的gDNA,這樣可以降低終文庫的濃度差異,便于混合文庫。
  3.大多數情況下引物是1管,操作相當方便;當目標區域是外顯子或者是其他連續區域時,把引物分裝為2管,需要第二輪PCR前把產物合并,再進行下一步反應。
  4.執行多重PCR反應時,特別是樣本量多的情況下,可以將T1設為一組,T2設為一組,便于制備反應試劑混合液和排槍操作;并把解凍好的試劑放置在冰盒上,在冰盒上進行加樣操作。
  5.實驗中,可以在PCR管壁上和管蓋上同時進行反應編號標記,防止高溫或其他原因導致記號消失,避免后續產物混合操作失誤,造成樣本交叉污染。
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