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PCR試劑盒六大使用事項請知悉!

瀏覽次數:176發布日期:2020-08-03
   PCR試劑盒在使用中我們應注意些什么呢?以下幾點給您答案:
  1.保存
  未拆封的試劑盒,請于-20℃保存;拆封之后,應在4℃保存。在試劑消耗量較少的實驗室,可以考慮將試劑盒的按照組分單獨分裝,后保存在-20℃。
  2.配置
  PCR試劑盒內所含各組份都是混合物,在靜置情況下會發生分層現象,因此試劑盒現配現用,震蕩混勻,避免反復凍融,避免預混。其中,反復凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。
  在擴增體系的選擇時,盡量選擇標準體系,再根據檢材情況加入模板,之后切勿忘記以PCR用水補足擴增體系。
  3.切勿預混
  因試劑盒中酶的活性較高,將各組份按照比例混合之后,即使沒有達到它的適溫度,但也可能發生與引物結合,導致實驗結果出現丟位點或者雜合子純化等情況。
  4.陰陽性參照
  實驗結果會受提取、擴增和電泳等多個環節的影響,因此,每次擴增實驗都應該添加一組陰陽性參照。這樣,當結果異常的時,我們就可以結合陰陽性參照的表現,排查問題出在哪個環節。
  5.陽性參照是否通用
  雖然多數試劑盒的陽性參照都是007,但是案件試劑盒和建庫試劑盒的陽性參照濃度不同,通常來說案件試劑盒的濃度更低,擴增時需選用試劑盒相對應的陽性參照。
  6.擴增程序
  擴增程序能夠將試劑盒大效能發揮出來而設計,切勿隨意更改;再者,不同試劑盒所含酶的升溫模式也有不同,因此,在設置擴增程序時,要選擇對應的升溫模式。
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