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今天小編或將為你解開PCR反應體系中,熒光染料法

瀏覽次數:250發布日期:2020-05-28

       PCR的時候,你是否還在費心的準備冰盒,是否還在擔憂會否因為室溫太高導致酶活降低甚至失效,今天小編或將為你解開這些煩憂。

       在傳統PCR反應體系中,加入過量熒光染料,該染料只與雙鏈DNA小溝結合的染料,并不與單鏈DNA鏈結合,而且在游離狀態不發出熒光,只有摻入DNA雙鏈中才可以發光,因此,在PCR體系中,隨著特異性PCR產物的指數擴增,每個循環的延伸階段,染料摻入雙鏈DNA中,其熒光信號強度與PCR產物的數量呈正相關。下圖以SYBR Green I染料為例:

    

反轉錄PCR(Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR)

RT-PCR是一種將cDNA合成與PCR技術結合分析基因表達的快速靈敏的方法,主要用于對表達信息進行檢測或定量分析。在實際應用中,RT—PCR又常常分為一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR。

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